Иммуноферментный анализ. Оценка сорбционной способности.

В 1969 г. появилось сообщение Avrameas о различных способах связывания ферментов с антителами при использовании глютаральдегидного метода для пероксидазы и щелочной фосфатазы. Этот новый реагент использован автором для определения как растворимых, так и связанных с тканями антигенов.

Иммуноферментный анализ. Оценка сорбционной способности.

В 1971 г. Engvall с сотр., используя конъюгат фермента с антителами и присоединив антитела к целлюлозе, создали метод, который позволял определять IgG человека . Авторы дали этому методу название ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), модифицировав его, используя метод Catt, Tregear (антитела иммобилизованы на внутренней поверхности полистирольных пробирок. В 1971 г. сообщено о применении метода ИФА для определения гормонов. Впервые в 1974 году в качестве твердой фазы использованы по-листирольные планшеты с адсорбированным малярийным антигеном для проведения анализа малярийной инфекции в полевых условиях С 1974 г. планшеты для микротитрования стали одним из важнейших ингредиентов иммуноферментного анализа (ИФА) при конструировании иммуноферментных (ИФ) тест-систем и использовании в диагностических целях. Цель исследований — проведение работ, позволяющих охарактеризовать компоненты ИФ-системы: твердая фаза (носитель); условия адсорбции молекул антитела и антигена на поверхности носителя и свойства полученных таким образом твердофазных антител или антигенов; препарат конъюгата антииммуноглобулина с ферментом пероксидазой,- для определения роли каждого из них в получении информативных и воспроизводимых результатов.
Процессы адгезии биополимеров на носителе можно рассматривать с точки зрения механической концепции.

При этом возможны различные способы взаимодействия: адсорбционный, химический способ (образование валентных связей), диффузионные взаимодействия, предусматривающие совместимость носителя и полимера в зоне контакта; реологическое взаимодействие, приводящее к повышению плотности контактирующих слоев, микрореологическое затекание полимера в микродефекты поверхности носителя, электрические взаимодействия (возникновение двойного электрического слоя на приведенных в контакт поверхностях); электрорелаксационные явления и т. д.
Указанные способы взаимодействия носителя с полистиролом, свидетельствуют о сложности процесса. Однако сорбционная способность носителя, в частности, полистирола, является более или менее стабильной, и, видимо, может быть управляема лишь на стадии литья. Тем не менее, увеличивать сорбционную способность планшета можно и с помощью различных обработок.
В наших исследованиях для увеличения сорбционной способности отдельных серий планшетов применяли предварительное облучение их УФ-лучами. Источником при этом служили бактерицидные лампы БУФ-15, БУФ-30. Сенсибилизацию планшетов проводили при 37 °С в течение 16 час Н-антиге-ном и ЛПС. Концентрации антигенов для сенсибилизации планшетов были предварительно подобраны.
Анализ данных литературы показал, что по сорбционным способностям отличаются планшеты не только разных фирм и серий, выпущенных одним изготовителем, но и внутри одной и той же серии. Поэтому строгое тестирование планшетов каждой серии необходимо для получения воспроизводимых результатов. Оценка сорбционной способности планшетов показала, что коэффициент вариации при адсорбции белкового антигена меняется от 5,2% до 29,5%. Согласно рекомендациям ВОЗ коэффициент вариации для получения воспроизводимых результатов должен быть не более 5%.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *